储存条件：-20℃，惠阳保姆13825404095有效期2年
产品组分
规格
All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix
400ul
dsDNase
50ul×2
10×dsDNase Buffer
200ul
Nuclease-Free Water
1ml×2
产品简介：
All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix 是一款高效、便捷、减少污 染的高质量一链 cDNA 合成试剂盒，包含 M-MLV GIII Reverse Transcriptase 及 其反应 Buffer、RNA 酶抑制剂、dNTPs, Oligo(dT)20VN 和随机引物等一链 cDNA 合成所需的所有组分，仅需加入 RNA 模板和水即可开始反应。由于该试剂盒 Oligo(dT)20VN 和随机引物是预混到逆转录酶里的，该逆转录试剂盒获得的 cDNA，下游可用于 qPCR。如果做普通 PCR 实验，推荐我公司生产的货号 F0202A 。
从细胞中提取的 RNA 往往存在基因组 DNA 污染，如果逆转录前不将其去除， 下游 qPCR 反应时基因组 DNA 与 cDNA 会同时被扩增(尤其当引物设计在同一外 显子上时)，从而影响基因表达定量准确性。本试剂盒采用 dsDNase 高效去除基 因组 DNA 污染，dsDNase 能够特异性消化双链 DNA (dsDNA 或 DNA-RNA 杂 合链中的 DNA 链)，并且具有热敏感性，在逆转录温度下即可快速不可逆地失活。 与传统使用 DNaseI 去除基因组 DNA 污染的方法相比，dsDNase 无需额外加入 EDTA 进行失活，不仅节省实验时间，而且降低了对逆转录反应的抑制。 可依据基因组污染严重程度选择采用去基因组 DNA 污染与反转录分开进行 的操作方法，或者去基因组污染与反转录一步法进行的操作方法。
使用方法：
针对基因组含量低的RNA样品(推荐方案)
①于冰上配制如下反应体系：
试剂
使用量
模板 RNAa
50 ng~1ug
All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix
4ul
dsDNase
1ul
Nuclease-Free Water
To 20ul
a. 推荐采用试剂盒提取的 RNA 作为模板
② 轻柔吸打混匀，瞬离；
③ 37℃温育2min，以去除基因组DNA污染；
④ 55℃温育15 min;
⑤ 反应结束后，85℃温育5 min以终止反应;注：若RNA中基因组DNA污染严重，可适当延长37℃温育时间至5 min。
⑥ 迅速将获得的 cDNA置于冰上，用于后续实验;或立即保存于-20°C。
针对基因组含量高 RNA 样品
1. 基因组 DNA 污染去除
①于冰上配制如下反应体系：
试剂
使用量
模板 RNAa
50 ng~1ug
10x DNase buffer
1ul
dsDNase
1ul
Nuclease-Free Water
To 10ul
a. 推荐采用试剂盒提取的RNA作为模板。
② 轻柔吸打混匀，瞬离;
③ 37℃温育2 min，以去除基因组DNA污染;
注:若RNA中基因组DNA污染严重，可适当延长37℃温育时间至5 min。
④ 65℃温育2 min，使dsDNase失活，冰上放置。
2. 第一链cDNA合成
① 于冰上配制如下反应体系：
试剂
使用量（实验组）
“实验 1”反应产物
10 μl
All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix
4 μl
Nuclease-Free Water
To 20 μl
② 轻柔吸打混匀，瞬离；
③ 50℃温育15min；
注：若目标RNA不含Poly(A)结构，可预先25℃温育10min。
④ 反应结束后，85℃温育5min，以终止反应；
⑤ 将获得的 cDNA 溶液置于冰上，用于后续实验。
注：cDNA溶液置于-20℃储存，建议不超过1周；置于-80℃可长期储存。
注意事项
预混液中已经包含Oligo(dT)20VN和随机引物，不仅适用于包含Poly(A)结构的真核生物mRNA，也适用于不含Poly(A)结构的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不适用于miRNA等小RNA模板。
